Ferramentas de diagnóstico emergentes para detecção de COVID-19 – parte 1.

Iniciamos hoje uma série de posts sobre metodologias de diagnóstico inovadoras que estão sendo desenvolvidas para a COVID-19. O artigo original foi publicado na revista  Biomedical Microdevices em 24 de novembro de 2020.

Até 14 de setembro de 2020, a China havia conduzido a maior quantidade de testes para triagem de indivíduos com COVID-19, com uma contagem de cento e sessenta milhões, seguida pelos EUA e Índia, com noventa e dois milhões e cinquenta e sete milhões de testes realizados, respectivamente. O número de testes realizados por 1000 pessoas é maior em países como Austrália, Canadá, EUA, Rússia, Arábia Saudita e Espanha. Relativamente menos testes são realizados por 1000 pessoas em países como Brasil, Peru, Colômbia e África do Sul.

Com o aumento em vários casos a cada dia, há uma necessidade constante para o diagnóstico das doenças. Atualmente, o diagnóstico do COVID-19 é feito usando testes baseados em ácido nucleico, com o RT-PCR sendo usado para detecção. Uma amostra da nasofaringe retirada para avaliar a presença de um ou vários ácidos nucléicos específicos para SARS-CoV-2 é a escolha preferida. Momento inadequado para coleta ou inadequação de amostras podem resultar em resultado falso-negativo.

Após a extração do RNA, é feita uma transcrição reversa do RNA do vírus SARS-CoV-2, que é convertido em uma fita de DNA complementar (cDNA),  seguido pela amplificação de regiões específicas do cDNA. Três regiões que geralmente são direcionadas para realizar as detecções usando RT-PCR são (a) o gene RDRP (gene da polimerase de RNA dependente de RNA), (b) o gene E (gene da proteína do envelope), e (c) o gene N (gene da proteína do nucleocapsídeo).

Dois tipos de RT-PCR estão atualmente disponíveis no mercado, um conhecido como formato singleplex e outro formato multiplexado. Em ambos os formatos, um primer e um conjunto de sondas são usados ​​para detectar RNase P (RP) humana para garantir que a extração de RNA foi bem sucedida. As etapas básicas para configurar o RT-PCR para detecção de COVID-19 são simples, embora seja necessário pessoal treinado para executá-las.

A principal desvantagem em usar apenas o teste de RT-PCR para detecção é a ocorrência de falso-negativo nas amostras, tornando difícil tomar as medidas necessárias e corretas para o tratamento do paciente. No caso de pacientes assintomáticos, torna-se difícil identificar tais indivíduos com base nos resultados de RT-PCR e tomar as ações necessárias para impedir a propagação da doença. Portanto, foi relatado que era benéfico fazer uso de tomografias computadorizadas para complementar os resultados de RT-PCR para um diagnóstico aprimorado da COVID-19.

Os principais problemas no diagnóstico usando o RT-PCR tradicional no teste de COVID-19 incluem a indisponibilidade de reagente suficiente para o teste, a necessidade de pessoal treinado para realizar o teste, além da disponibilidade de um laboratório desenvolvido e bem equipado para todo o processo para ocorrer de forma crítica. Por último, o tempo necessário para a conclusão do teste é muito grande para produzir resultados. A capacidade dos ensaios de RT-PCR para descartar COVID-19 com base em amostras do trato respiratório superior obtidas em um único ponto de tempo permanece obscura.

QUAIS SÃO, ENTÃO, AS ALTERNATIVAS QUE DISPOMOS? NÃO PERCA A CONTINUAÇÃO NO POST DE AMANHÃ.

FONTE: Emerging diagnostic tools for detection of COVID-19 and perspective. Verma, N.; Patel, D.; Pandya, A.. Biomed Microdevices ; 22(4):83, 2020.